Rapid and accurate detection for Staphylococcus aureus in drugs based on real-time fluorescent quantitative PCR

MIN Hong; CAI Hu; SUN Yao; HU Fei; WANG Xinwang; MA Pengfei; MIAO Baogang

doi:10.15983/j.cnki.jsnu.2024228

Journal of Shaanxi Normal University(Natural Science Edition) >

2024 , Vol. 52 >Issue 5: 113 - 121

DOI: https://doi.org/10.15983/j.cnki.jsnu.2024228

Rapid and accurate detection for Staphylococcus aureus in drugs based on real-time fluorescent quantitative PCR

MIN Hong ¹^,² ,
CAI Hu ^,¹^,^* ,
SUN Yao ³ ,
HU Fei ³ ,
WANG Xinwang ³ ,
MA Pengfei ¹ ,
MIAO Baogang ³

Expand

¹ Shaanxi Institute for Food and Drug Control, Xi'an 710065, Shaanxi, China
² NMPA Key Laboratory for Testing Technology of Pharmaceutical Microbiology, Xi'an 710065, Shaanxi, China
³ Xi'an Tianlong Science and Technology Co.,Ltd, Xi'an 710021, Shaanxi, China

Received date: 2023-11-20

Online published: 2024-09-27

Fold

Abstract

In order to achieve accurate and rapid detection for Staphylococcus aureus in drugs, through adding internal amplification control (IAC) and optimizing PCR reaction system, an internal reference based fluorescence quantitative PCR rapid detection method of Staphylococcus aureus that can monitor the process in real time was established, and its specificity, detection limit, reproducibility and feasibility were verified. The verification results showed that the specificity of the established method was good with only Staphylococcus aureus showed typical amplification curve. The detection limit of Staphylococcus aureus genomic DNA was 0.23 pg/μL. There was a good linear relationship between C_t values and the copy numbers of template (R²=0.99). The relative standard deviations of reproducibility experiments were all less than 3.0%.Staphylococcus aureus can be detected 10 h after the bacteria increase in artificially contaminated drugs. The method can not only shorten the detection time of Staphylococcus aureus in drugs, but can also monitor the PCR reaction process, effectively prevent the occurrence of “false negative” result, thus can be used as a supplementary method for staphylococcus aureus detection.

Key words： drugs; Staphylococcus aureus; internal amplification control; real-time fluorescent quantitative PCR

Cite this article

MIN Hong , CAI Hu , SUN Yao , HU Fei , WANG Xinwang , MA Pengfei , MIAO Baogang . Rapid and accurate detection for Staphylococcus aureus in drugs based on real-time fluorescent quantitative PCR[J]. Journal of Shaanxi Normal University(Natural Science Edition), 2024 , 52(5) : 113 -121 . DOI: 10.15983/j.cnki.jsnu.2024228

金黄色葡萄球菌是环境和人体中的一种常见致病微生物,其感染后可引起人类皮肤疖、软组织脓肿、骨髓炎、关节炎、心脏内膜炎、败血症等多种疾病^[1]。《中华人民共和国药典》2020年版中明确指出:口腔黏膜给药制剂、皮肤给药制剂、耳用制剂、呼吸道吸入给药制剂、阴道尿道给药制剂、直肠给药制剂均不得检出金黄色葡萄球菌^[2]。若在药品中检出有金黄色葡萄球菌,则表明药品生产环境未达到《药品生产质量管理规范》要求^[3-4]。

《中华人民共和国药典》2020年版中关于金黄色葡萄球菌的检验方法如下:先将1∶10供试液接种于胰酪大豆胨液体培养基,后划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基,再经过适宜的鉴定确认是否为金黄色葡萄球菌。该方法的检测周期长,一般需要5 d。这一方面会延长产品的放行时间,增加企业运行成本;另一方面只可用于长效期类药物中金黄色葡萄球菌的检验,无法满足对干细胞、疫苗等需要快速放行药品的检测^[5⇓⇓-8]。此外,此方法只适用于产品的离线检验,并不适用基于过程控制和风险评估的现代化管理模式。

目前,有关食品中金黄色葡萄球菌的快检方法很多,包括常规PCR结合毛细管电泳技术^[9]、多重PCR法^[10]、多重荧光PCR法^{[11⇓⇓-14]}、恒温核酸检测法^[15]、快速测试片法^[16]、微滴式数字PCR技术^[17]、功能性硼酸盐纤维过滤纸结合荧光探针技术^[18]、可调节磁捕获桶结合数字荧光技术^[19]等;但药品中金黄色葡萄球菌快检的方法较少,仅包括微量热法^[20]和实时荧光定量PCR法^[21-22]。

实时荧光定量PCR技术在金黄色葡萄球菌的快速检验中应用较多,但该技术容易受到样品本底、核酸提取残留等因素的干扰,出现“假阴性”结果。本研究在核酸实时荧光定量PCR反应体系中引入内参(internal amplification control,IAC)技术,可实现对整个反应过程的实时监测,有效防止“假阴性”结果的产生;并在此基础上进一步对方法的特异性、检测限、重现性、可行性进行验证,开发药品中金黄色葡萄球菌的快速精准检验方法。

1 材料与方法

1.1 实验菌株

恶臭假单胞菌(ATCC49128)、铜绿假单胞菌(ATCC27853)、副溶性血弧菌(ATCC17802)、鼠伤寒沙门氏菌(ATCC14028)、阪崎肠杆菌(ATCC29544)、大肠埃希氏菌(ATCC25922)、产气肠杆菌(CMCC(B)45103)、蜡样芽胞杆菌(ATCC11778)、枯草芽孢杆菌(CMCC(B) 63501)、艰难梭菌(GDMCC12602)、产气荚膜梭菌(ATCC13124)、英洛克李斯特氏菌(ATCC33090)、表皮葡萄球菌(CMCC(B)26009)、粪肠球菌(ATCC29212)、粪链球菌(ATCC51299)和金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003)的标准菌株均为第3代,购自商城北钠创联生物科技有限公司。

1.2 药品信息

妇必舒胶囊,陕西孙思邈高新制药有限公司,生产批号230501;积雪苷霜软膏,陕西康惠制药股份有限公司,生产批号230401;偎脓生肌膏,铜川市印台区压疮烧伤医院,生产批号20221201;麝香祛痛搽剂,陕西康惠制药股份有限公司,生产批号230603。

1.3 试剂与仪器

胰酪大豆胨液体培养基(TSB),海博生物技术有限公司;聚山梨酯80,国药集团化学试剂有限公司;血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒,北京天根生化科技有限公司;细菌基因组DNA提取试剂盒,西安天隆科技有限公司;SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒、2×TaqMan Fast qPCR MasterMix、pUCm-T载体,生工生物工程(上海)股份有限公司。

CYT5M-SN型酶标仪,美国Agilent公司;GeneRotex 96型全自动核酸提取仪,西安天隆科技有限公司;LightCycler96型实时荧光定量PCR仪,罗氏诊断(上海)有限公司;Gentier 48E型全自动PCR分析系统,西安天隆科技有限公司。

1.4 方法

1.4.1 引物和探针

根据《出口食品致病菌检测方法微滴式数字PCR法第5部分:金黄色葡萄球菌》(SN/T 5364.5—2021),选择耐热核酸酶编码基因(nuc)特异性序列片断作为金黄色葡萄球菌的检测靶基因。所有引物、探针均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。引物序列信息见表1。

表1 引物序列信息

Tab.1 Information of primer sequences

引物名称	引物序列(5'-3')	产物大小/bp
SA	F:AGCATCCTAAAAAAGGTGTAGAGA	87
	R:CTTCAATTTTMTTTGCATTTTCTACCA
	FAM-TTTTCGTAAATGCACTTGCTTCAGGACCA-BHQ1
IAC^[23]	F:AATGGAGAAAGCCCCTGTGAAG	122
	R:TCACGTGAACCTGGAATTTGAC
	CY5-CACTGCGCATCTAGTCCCGCTGAAC-BHQ3

1.4.2 扩增内参的构建

采用复合引物法构建扩增内参,选择乳仓鼠肾细胞(BHK-21)的Nmi基因作为内参(internal amplification control,IAC)基因,在内参引物上连接SA引物,形成1对内参引物和目标引物的长引物,经长引物扩增后得到内参片段。将其连接载体pMD19-T并转化感受态细胞,测序验证;提取质粒,并使用酶标仪测定质粒浓度,-20 ℃保存备用。

1.4.3 细菌基因组DNA的提取

取细菌培养液1.5 mL至离心管中,在10 000 r/min条件下离心1 min,弃上清。向沉淀中加入180 μL溶菌酶溶液和20 μL蛋白酶K,50 ℃水浴30 min,再加入200 μL菌体消化液和20 μL核糖核酸酶,使用细菌基因组DNA提取试剂盒提取细菌基因组DNA。

1.4.4 基于内参的实时荧光定量PCR反应体系的建立

以金黄色葡萄球菌基因组DNA作为模板,取不同浓度的引物和探针进行组合,选择能达到最低C_t值和最高荧光强度的组合为最佳组合。反应体系为20 μL:2×TaqMan Fast qPCR MasterMix 10 μL,DNF Buffer 2 μL,SA上下游引物终物质的量浓度为0.2、0.4、0.6、0.8 μmol/L,探针终物质的量浓度为0.14、0.16、0.18、0.20 μmol/L,内参(internal amplification control,IAC)添加量分别为10³、10⁴、10⁵拷贝数,模板DNA 50~250 ng,用ddH₂O补足体系。反应条件为:94 ℃预变性180 s;94 ℃变性5 s,54 ℃退火15 s,72 ℃延伸30 s,40个循环;72 ℃收集荧光。

1.4.5 方法特异性验证

以水作为空白对照,使用1.4.4中确立的最佳反应条件,提取“1.1实验菌株”中金黄色葡萄球菌和其他实验菌株的基因组DNA,进行实时荧光定量PCR扩增,通过扩增曲线确定方法的特异性。

1.4.6 方法检测限测定

采用酶标仪对提取的金黄色葡萄球菌基因组DNA进行浓度检测,并用ddH₂O进行10倍梯度连续稀释,每个稀释度各取1 μL作为模板进行PCR扩增,以能得到扩增曲线的最低质量浓度为该方法的检测限。

1.4.7 标准曲线构建

提取质粒并测定浓度,利用公式:质粒浓度/(质粒长度+插入片段长度)×2×324.5,计算对应拷贝数。将其10倍稀释至10^-7,制成标准模板溶液,分别取10^-7、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2、10^-1、10⁰质粒1 μL作为模板,进行实时荧光定量PCR反应,通过不同浓度质粒及相应C_t值,建立标准曲线。

1.4.8 方法重现性验证

分别选择2个不同实验地点(916和919实验室)、2种实时荧光定量PCR仪(西安天隆GeneRotex 96型全自动核酸提取仪和罗氏LightCycler96型实时荧光定量PCR仪)、2批次2×TaqMan Fast qPCR MasterMix试剂(批号为I127KA3433和J626KA9927),对230 ng/μL、23 ng/μL、2.3 ng/μL、0.23 ng/μL、0.023 ng/μL、0.002 3 ng/μL共6组质量浓度的金黄色葡萄球菌基因组DNA利用建立的方法同步开展PCR扩增检测,每个稀释度重复3次。计算C_t值的标准差(standard deviation,SD)和相对标准偏差(relative standard deviation,RSD),评价实验结果重现性。

1.4.9 可行性检测

对比《中华人民共和国药典》2020年版金黄色葡萄球菌经典检验方法^[24]和实时荧光定量PCR法,确定药品中金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR检测方法的可行性。取供试品10 g或10 mL(已根据《中华人民共和国药典》2020年版通则1106检测为金黄色葡萄球菌阴性),加入含5%聚山梨酯80的TSB至100 mL,40 ℃水浴振摇至分散均匀,制成1∶10供试液。取1∶10供试液10 mL接种至200 mL TSB中,同时接入含菌量不大于100 CFU的金黄色葡萄球菌实验菌液1 mL,35 ℃分别培养6 h、10 h和18 h。

药典方法为:取培养液划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基,35 ℃培养72 h,采用VITEK全自动生化鉴定系统进行鉴定。

实时荧光定量PCR法为:分别取培养液10 mL至离心管中,500 r/min离心1 min,取上清液10 000 r/min离心5 min,弃上清;向沉淀中加入180 μL溶菌酶溶液和20 μL蛋白酶K,50 ℃水浴30 min,再加入200 μL菌体消化液和20 μL核糖核酸酶,采用细菌基因组DNA提取试剂盒提取细菌基因组DNA,并用建立的金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR反应体系进行检测。

2 结果与分析

2.1 基于内参的实时荧光定量PCR反应体系的建立

当引物为0.6 μmol/L、靶基因探针为0.16 μmol/L、IAC探针为0.16 μmol/L时,反应体系的荧光信号最强,出现曲线最早,确定为最佳工作条件。当IAC的添加量为10⁴拷贝数时,既能出现明显的CY5信号,又不会对SA的检测有明显影响。

2.2 方法的特异性

方法特异性检验结果如图1a所示,可以看出,使用建立的方法对金黄色葡萄球菌和其他细菌的基因组DNA进行检测,仅有金黄色葡萄球菌基因组DNA为阳性,呈现出典型的扩增曲线,其他菌株(恶臭假单胞菌、铜绿假单胞菌、副溶性血弧菌、鼠伤寒沙门氏菌、阪崎肠杆菌、大肠埃希氏菌、产气肠杆菌、蜡样芽胞杆菌、枯草芽孢杆菌、艰难梭菌、产气荚膜梭菌、英洛克李斯特氏菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、粪链球菌)均无扩增曲线,说明方法具有较好的特异性。由图1b结果可以看出,在所有菌株反应中IAC均扩增良好,可作为内参实时监测PCR反应过程,有效防止“假阴性”结果的发生。

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图1 金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR特异性结果

Fig.1 Specificity of Staphylococcus aureus by real-time fluorescent quantitative PCR

2.3 方法的检测限

采用酶标仪检测得出金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取初始质量浓度为230 ng/μL,将其10倍梯度连续稀释后作为模板进行实时荧光定量PCR,其在质量浓度2.3×10^-3~2.3×10²ng/μL范围内均可出现特异性扩增,并呈现出良好的线性关系,标准曲线方程为Y=-3.380 9 lg X+41.43,反应效率为1.00,基因组DNA检测限为2.3 pg/μL,结果如图2a所示。若将PCR循环数延长至45个循环,金黄色葡萄球菌基因组DNA在2.3×10^-4~2.3×10²ng/μL范围内均可出现特异性扩增,检测限提升至0.23 pg/μL,结果如图2b所示。

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图2 金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR检测限结果

注:1~7表示金黄色葡萄球菌基因组DNA质量浓度分别为230、23、2.3、0.23、0.023、0.002 3、0.000 23 ng/μL。

Fig.2 Detection limit of Staphylococcus aureus by real-time fluorescent quantitative PCR

2.4 质粒DNA标准曲线的建立

实时荧光定量PCR反应的标准曲线方程为Y=-3.558 2 lg X+13.75,反应效率为0.91,R²为0.99;不同浓度模板拷贝数的对数与C_t值均呈现出良好的线性关系,最低检测限可以达到10³拷贝数/μL。

2.5 方法的重现性

选择不同仪器、不同试剂批次、不同实验室进行方法重现性实验,结果表明(表2),6种不同质量浓度的金黄色葡萄球菌基因组DNA(230、23、2.3、0.23、0.023、0.002 3 ng/μL)C_t值的标准差均小于1,相对标准偏差均小于3.0%,说明方法的重现性较好。随着金黄色葡萄球菌基因组DNA质量浓度的降低,C_t值的标准差和相对标准偏差均逐渐增大,这可能是因为随着金黄色葡萄球菌基因组DNA质量浓度的降低实验误差逐渐增大。

表2 方法的重现性检测结果

Tab.2 Reproducibility test results of the method

质量浓度/ (ng·μL^-1)	C_t值						标准差	相对标准偏差
质量浓度/ (ng·μL^-1)	罗氏仪器、916室、试剂批号I127KA3433			天隆仪器、919室、试剂批号J626KA9927			标准差	相对标准偏差
230	14.14	14.37	14.31	14.54	14.50	14.42	0.14	1.0%
23	17.97	17.74	17.54	17.67	17.71	17.73	0.14	0.8%
2.3	20.78	21.05	20.95	21.20	21.22	21.29	0.19	0.9%
0.23	23.93	24.23	24.14	24.72	24.69	24.75	0.35	1.4%
0.023	27.34	27.63	27.83	28.63	28.61	28.60	0.58	2.1%
0.002 3	31.02	31.69	32.27	33.54	32.90	33.22	0.96	2.9%

2.6 方法的可行性

本研究选用4种药品培养基分别接种不大于100 CFU的金黄色葡萄球菌,进行人工模拟污染药品中金黄色葡萄球菌的传统药典方法检测和实时荧光定量PCR检测,结果如表3所示。

表3 人工污染药品中金黄色葡萄球菌的检测结果

Tab.3 Test results of Staphylococcus aureus in artificially contaminated medicines

样品	菌液浓度/ (10^-7 CFU·mL^-1)	药典检测法				实时荧光定量PCR法(C_t值)
样品	菌液浓度/ (10^-7 CFU·mL^-1)	6 h	10 h		18 h	6 h		10 h		18 h
妇必舒	66	未检出		未检出	检出	未检出	未检出		23.34
胶囊	78	未检出		未检出	检出	未检出	未检出		23.22
	63	未检出		未检出	检出	未检出	未检出		23.31
积雪苷	66	未检出		未检出	检出	未检出	27.12		19.20
霜软膏	78	未检出		未检出	检出	未检出	26.50		19.28
	63	未检出		未检出	检出	未检出	27.04		19.54
偎脓生	66	未检出		未检出	检出	未检出	27.89		21.03
肌膏	78	未检出		未检出	检出	未检出	27.86		21.40
	63	未检出		未检出	检出	未检出	27.81		21.08
麝香祛	66	未检出		未检出	检出	未检出	25.99		21.66
痛搽剂	78	未检出		未检出	检出	未检出	25.65		22.12
	63	未检出		未检出	检出	未检出	25.64		22.23

采用《中华人民共和国药典》2020年版检测方法,在TSB中增菌6 h和12 h,再划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基,35 ℃培养72 h,均未能检出金黄色葡萄球菌;而在TSB中增菌18 h,4种药品中均可检出金黄色葡萄球菌。

采用实时荧光定量PCR法进行检测,在TSB增菌6 h后,4种药品中均未检出金黄色葡萄球菌;增菌10 h后,即可从起始菌液浓度为0.5 CFU/mL的积雪苷霜软膏、偎脓生肌膏和麝香祛痛搽剂培养液中检出金黄色葡萄球菌;增菌18 h后,可以从妇必舒胶囊中检出金黄色葡萄球菌。

3 讨论

实时荧光定量PCR技术具有特异性强、灵敏度高、可定量、自动化程度高、快速高效等优点,可弥补传统微生物检测方法的不足。但是,该技术在检验过程中容易受药品、食品、化妆品等本底及核酸提取残留等多种因素的干扰,出现定量结果偏差或“假阴性”结果。内参基因是指其表达水平不受研究条件的影响且可以在多种样本间恒定表达的已知参照基因^[25],在核酸实时定量PCR反应体系中引入内参基因可以有效防止“假阴性”结果的产生。如果样品在检测过程中出现靶基因检测为阴性,而内参基因也没有扩增信号的现象,则说明PCR反应无效,而并非所检样品中不存在目标基因。这可能是因为样品基质中存在一些抑制PCR扩增的成分^[26],或者核酸提取过程中残留物质抑制了PCR扩增,甚至可能是实验人员操作过程出现错误而导致定量值较低。在此情况下,需要分析原因并重新检测,以保证检测结果的准确性和可靠性。

《中华人民共和国药典》2020年版“药品微生物检验替代方法验证指导原则”规定:在控制药品微生物质量中,采用非药典规定的替代方法时,应进行替代方法的验证,确认其应用效果优于或等同于药典方法。对于样品中微生物的定性检测方法,需开展专属性、检测限、重现性等方面的验证^[27]。

专属性是通过检测适宜的实验菌,以证明检验方法与其设定目的相适应的能力^[27]。本研究选择2种非发酵型细菌(恶臭假单胞菌、铜绿假单胞菌),5种发酵型革兰氏阴性细菌(副溶性血弧菌、鼠伤寒沙门氏菌、阪崎肠杆菌、大肠埃希氏菌、产气肠杆菌),5种棒状杆菌(蜡样芽胞杆菌、枯草芽孢杆菌、艰难梭菌、产气荚膜梭菌、英洛克李斯特氏菌),1种凝血酶阴性的葡萄球菌(表皮葡萄球菌),2种其他革兰氏阴性细菌(粪肠球菌、粪链球菌)和金黄色葡萄球菌一起开展专属性实验。结果表明该方法仅对金黄色葡萄球菌有典型扩增曲线,对其他菌株均无扩增。

检测限是指在替代方法设定的检验条件下,样品中能检出的微生物最低数量^[27]。周海波等^[28]采用实时荧光PCR技术建立了金黄色葡萄球菌的检测方法,其对sa19基因组的灵敏度为40.7 pg/μL,对sea344、seu222基因组的灵敏度均为4.07 pg/μL。王建昌等^[23]针对大肠埃希氏菌O157∶H7的rfbE和Flic靶基因保守序列,建立出能够实时监控反应过程的实时荧光定量PCR检测方法,该方法的最低检测限为1 pg/μL。Anish等^[10]在模板量低至4.5 pg/μL(单重PCR)和900 pg/μL(多重PCR)时成功扩增出金黄色葡萄球菌基因组DNA。本研究针对金黄色葡萄球菌基因组DNA建立的基于内参的实时荧光定量PCR检测方法,其检测灵敏度为2.3 pg/μL,若将PCR循环数延长,灵敏度可提升为0.23 pg/μL。对比相关研究,该检测方法的灵敏度较高。

重现性是指在实验地点、实验人员、仪器、试剂批次等正常实验条件发生变化时,所得检验结果的精密度。对检验结果进行统计分析时,以相对标准偏差进行评价^[27]。目前,有关金黄色葡萄球菌的快检方法中,大多关注方法的专属性和检测限,很少关注重现性。李蕾等^[20]开发的微量热法,选择不同实验人员、不同日期、不同批次培养基开展了重现性实验。本研究采用不同实验室、不同实时荧光定量PCR仪、不同批次试剂开展重现性实验,其相对标准偏差均小于3.0%,表明所建立方法的重现性较好。

《中华人民共和国药典》2020年版规定外用制剂不得检出金黄色葡萄球菌^[2],因此本研究选取4种皮肤给药制剂开展人工污染金黄色葡萄球菌的检测。皮肤给药制剂多为软膏剂,软膏剂为油脂类样品,因此在稀释剂中加入5%的聚山梨酯80以增加样品的乳化和溶解^[29-30]。取1∶10供试液接种至胰酪大豆胨液体培养基中,由于多数药品不能溶解于培养基,因此本研究先将培养液500 r/min离心1 min,将未溶解的药品沉淀,再取上清液10 000 r/min离心5 min,取菌体沉淀进行核酸提取。该操作可确保溶菌酶、蛋白酶K和菌体消化液与菌体充分接触,防止药品干扰菌体裂解和消化。不同药品的抑菌性不一致,导致药品培养液中金黄色葡萄球菌的繁殖速度不同。妇必舒胶囊对金黄色葡萄球菌的抑制作用较强,经500 r/min离心后上清液中仍存留有未溶解药品,从而降低了核酸提取率,因此在增菌18 h后才检出金黄色葡萄球菌。本研究所建立的检测方法10~18 h就能检出药品中污染的金黄色葡萄球菌,而根据现行国标方法至少需要4 d时间^[24]。检测时限的缩短可以让产品快速放行,降低企业运行成本,适用基于过程控制和风险评估的现代化管理模式。

4 结论

本研究建立了能够实时监控过程的基于内参的金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR快检方法。该方法的特异性好;对金黄色葡萄球菌基因组DNA的检测限为0.23 pg/μL;重现性实验的相对标准偏差均小于3.0%;人工污染药品增菌10 h后即可检出金黄色葡萄球菌。该方法可有效防止“假阴性”结果的发生,实现了药品中金黄色葡萄球菌的精准快速检测。

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